2020-03-27
FlowCam具備高靈敏度，高質量的顆粒圖像，精確的濃度檢測和直測粒徑等性能，從一次實驗結果中就能夠獲得“顆粒有多少”，“顆粒有多大”，“顆粒是什么”等信息。
目的：研究建立抗程序性死亡受體配體 1（programmed cell death protein ligand 1，PD-L1）單抗的質量控制方法。
方法：利用成像毛細管等電聚焦電泳（imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis，iCIEF）、肽圖對抗 PD-L1 單抗進行鑒別；利用還原 / 非還原十二烷基磺酸鈉毛細管電泳 （capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate，CE-SDS）、分子排阻高效液相色譜（size exclusion-high performance liquid chromatography，SEC-HPLC）、離子交換高效液相色譜（ion exchange-high performance liquid chromatography，IEC-HPLC）對抗 PD-L1 單抗的純度進行控制；利用細胞結合抑制法和轉基因細胞法測定抗 PD-L1 單抗的活性；利用光阻法和液流成像分析法對不溶性微粒進行檢測和分析。
結果：抗 PD-L1 單抗的 iCIEF 檢測結果具有特征性主峰，肽圖檢測具有相應特征峰，起到很好的鑒別作用。還原 CE-SDS 的輕鏈與重鏈峰面積之和的百分比為（98.37±0.21）%，非還原 CE-SDS 主峰峰面積百分比為（96.33±0.15）%；SEC-HPLC 單體的峰面積百分比為（99.43±0.02）%；IEC-HPLC 酸性區(qū)峰面積百分比、主峰峰面積百分比、堿性區(qū)峰面積百分比分別為（13.63±0.40）%、（80.00±0.36）%、（6.37±0.15）%。細胞結合抑制法與轉基因細胞法的活性檢測均呈現劑量反應曲線，反映抗 PD-L1 單抗劑量依賴性地阻斷程序性死亡受體 1（programmed cell death protein 1，PD-1）與 PD-L1 的結合及后續(xù)的生物學效應。光阻法檢測≥ 10 μm 及≥ 25 μm 的不溶性微粒數分別為（1.33±0.58）粒·mL -1 和（0.00±0.00）粒·mL -1 ；液流成像分析法檢測 2~10 μm、≥ 10 μm及≥ 25 μm 的微粒數分別為（1 243.67±242）粒·mL -1 、（45.67±16.07）粒·mL -1 和（10.00±5.00）粒·mL -1 ，其中，蛋白聚體占 87.45%，非蛋白聚體占 12.55%。
圖 1 抗 PD-L1 單抗參比品（A）與樣品（B）的 iCIEF 代表圖譜
圖 2 抗 PD-L1 單抗參比品（A）與樣品（B）的肽圖代表圖譜
討論：研究建立了抗 PD-L1 單抗的多種質控方法，為國內抗 PD-L1 單抗的質量檢測提供了參考依據。
郭莎，王開芹等，抗 PD-L1 單抗的質量控制研究，藥物分析雜志，2019，39（1）：13-22
Fluid Imaging Technologies(FlowCam)公司成立于1999年美國緬因州斯卡伯勒市，其研發(fā)并生產的FlowCam系列儀器是將流式細胞法組合到數字成像顯微鏡中，基于圖像分析法的流式動態(tài)成像顆粒分析儀，它使顆粒分析變得更快，更簡單。具有革新意義的FlowCam系列儀器被廣泛應用于研發(fā)和質量控制，應用涉及多個領域。
流式顆粒成像分析系統(tǒng)FlowCam®8000系列具有以下優(yōu)點。
1.測量粒度和顆粒形狀-對每個顆粒成像后都可以獲得30多種形態(tài)學測量結果。
2.快速提供具有統(tǒng)計意義的結果-用戶可在過程種觀察到每分鐘數以萬計的顆粒。
3.提供*的成像質量和基于成像法的測量參數-可以看到快速和準確的，可由定量數據證明的檢測測量結果。
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